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引物增值服务
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基本概念:
引物是一小段单链核酸,作为DNA复制的起始点,在PCR反应时,与模板链通过碱基互补结合,在taq酶,dNTP等参与下,完成DNA链的复制。引物的长度,GC含量,TM值等对PCR成功与否起到至关重要的作用。

引物类型:
1 定量PCR引物,染料法引物和探针法引物
2 普通PCR引物
3 兼并引物,可以扩增不同的模板
4 多重PCR引物
5 基因全长引物
6 miRNA茎环、引物和探针
7 巢式PCR引物,较难扩增的片段推荐使用
8 lncRNA引物
9 环状RNA引物

服务优势:
1 周期短,对于不同基因设计2-3对引物,同时进行实验,可以有效缩短实验周期
2 重复性好,使用客户提供的cDNA或者DNA进行实验,确保客户在收到引物后,可以顺利完成实验


可以用于正式实验的引物必须满足以下条件:
1 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附近




2 琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时PCR产物在100bp以下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50bp左右,条带弥散,暗。


 
3 扩增曲线呈“S”形,一般情况下,S形越陡,扩增效率越高,S形越平,扩增效率低。有时会出现扩增曲线只有线性期,没有指数期的情况,这时一般扩增效率较低,建议检测一下扩增效率,用标准曲线法计算相对表达量。


 
4 样品Ct值小于30,对于Ct大于30的情况,建议重新设计一对引物,重新调试。如果几对引物的Ct值都较大,可以适当放宽Ct至35。但是Ct值肯定不能大于35。
 

服务流程:
1 订单洽谈,确定需要设计引物的序列或者基因名。
如对引物的长度,TM值,产物长度等有特殊要求,需提前说明。
2 引物设计,合成,验证。
3 寄送1对经过验证的可以用于正式实验的引物,上下游各1 OD。
4 验证,客户收到引物后,进行qPCR验证,满足实验要求,订单结束。

表单下载:

引物增值服务订单表.xls 

 

 

 

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